国产激光共聚焦显微镜的使用步骤

　　国产激光共聚焦显微镜的核心在于利用激光作为光源，通过一系列精密光学组件实现对样品的高精度成像。激光束经照明针孔后形成点光源，聚焦于样品上的特定微小区域，激发样品中的荧光分子发光。这些被激发出的荧光信号携带着样品的结构与成分信息，沿着原路返回，穿过物镜、共聚焦针孔后，被光电探测器接收。
 

　　共聚焦针孔起着关键作用，只允许来自焦平面上那一点光信号通过，而偏离焦平面的光信号则被阻挡。这样一来，通过逐点扫描样品，就能获取不同层面的清晰图像。计算机系统会对这些扫描数据进行处理与整合，构建出样品的三维立体图像，让研究者能直观洞察样品内部的微观结构与动态变化。
 

　　国产激光共聚焦显微镜的测定步骤：
 

　　1.开机准备：
 

　　-按顺序打开总电源、显微镜控制器、激光器等设备，最后启动电脑和相应操作软件。
 

　　-等待硬件自检完成，确保仪器状态正常。
 

　　2.样品放置与观察：
 

　　-将制备好的荧光标记样品(如细胞、组织切片)置于载玻片或专用培养皿中，盖玻片厚度需≤0.17mm。
 

　　-在明场模式下调整物镜(如2.5x、10x低倍镜)找到样品位置，切换至荧光模式(RL)观察荧光分布。
 

　　3.参数设置：
 

　　-激发与检测配置：根据荧光探针的激发/发射波长选择激光光源、滤光片及探测器通道。
 

　　-扫描模式：选择点、线、面或3D扫描方式，设置分辨率(如1024×1024)和扫描速度。
 

　　-光学参数：调节针孔大小(通常1AU)、激光强度、增益值(Gain<800)以避免过曝。
 

　　4.图像采集：
 

　　-使用“Smart Setup”添加通道并选择信号模式(如Best Signal模式避免串色)。
 

　　-设置扫描范围(Scan Area)、层扫间距(Z-Stack)或时间序列参数(Time-Series)。
 

　　-点击“Live”实时观察，调整焦平面后保存图像(格式如CZI或TIFF)。
 

　　5.关机维护：
 

　　-按开机反向顺序关闭软件、激光器、电源，注意卤化灯关闭后30分钟内勿重启。
 

　　-清洁物镜(油镜需擦拭干净)，确保无残留油污或荧光染料。